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全自動(dòng)酶標儀有關(guān)測定波長(cháng)的相關(guān)研究

更新時(shí)間:2022-10-26      點(diǎn)擊次數:409
   全自動(dòng)酶標儀如今廣泛用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應用,使得它在生殖保健領(lǐng)域中應用越來(lái)越廣泛,同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
  全自動(dòng)酶標儀的光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測標本。該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過(guò)標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號。電信號經(jīng)前置放大,對數放大,模數轉換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數據處理和計算,由顯示器和打印機顯示結果。

 全自動(dòng)酶標儀
  微處理機還通過(guò)控制電路控制機械驅動(dòng)機構X和Y方向的運動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現自動(dòng)進(jìn)樣檢測過(guò)程。而另一些自動(dòng)酶標儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測,因此省去了X、Y方向的機械驅動(dòng)機構和控制電路,從而使儀器更小巧,結構也更簡(jiǎn)單。
  一般來(lái)說(shuō),全自動(dòng)酶標儀使用時(shí)分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩種,不過(guò)這兩者的工作原理基本上是一致的,核心都是比色計,也就是用比色法來(lái)進(jìn)行分析。
  全自動(dòng)酶標儀的測定波長(cháng)研究:
  一般酶標儀的測定波長(cháng)在400-750nm或800nm之間,則可以滿(mǎn)足ELISA的顯色測定。目前國內常見(jiàn)的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過(guò)氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過(guò)氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當pH值為5.0左右時(shí),DAB在450nm波長(cháng)處有大吸收,當pH值降為L(cháng) 0時(shí),大吸收波長(cháng)移至492 nm,同時(shí)摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(cháng)450nm處有大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過(guò)量時(shí),則形成藍色的陽(yáng)離子根。降低pH,即可使藍色的陽(yáng)離子根轉變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩定90min.因此,450nm和492 nm兩個(gè)波長(cháng)是目前ELISA測定常用的。
  各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉換的部件,可以同時(shí)安裝6-8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個(gè)波長(cháng),有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個(gè)基本濾光片外,考慮到雙波長(cháng)比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長(cháng)的濾光片,其他濾光片可根據實(shí)際需要選擇。有時(shí)實(shí)驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故酶標儀廠(chǎng)家對其生產(chǎn)時(shí)擴展了紫外檢測功能,此時(shí)需要一個(gè)340nm波長(cháng)濾光片。此時(shí),酶標儀的測定波長(cháng)范圍就成為340-750nm或800nm。
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